Clonagem do cDNA e sequenciamento parcial do gene que codifica a enzima glutamato desidrogenase hepática de ovino

Resumo

A enzima mitocondrial glutamato desidrogenase (GDH: EC 1.4.1.2) catalisa a desaminação reversível do L-glutamato para 2-oxoglutarato (α-cetoglutarato) usando o NAD⁺ e NADP⁺ como coenzimas. É uma das mais importantes enzimas hepáticas encontradas em hepatócitos de bovinos, ovinos e caprinos. Infecções por Fasciola spp., intoxicação grave aguda por toxinas de plantas, tais como Xanthium spp. e Senecio spp. e intoxicação por cobre resultam na liberação dessa enzima no sangue. O aumento da GDH indica danos ou necrose hepática em bovinos e ovinos. Esta é a enzima de escolha para avaliar a função hepática dos ruminantes. No presente trabalho o cDNA que codifica a enzima GDH do hepatócito de ovino foi sintetizado por meio de RT-PCR utilizando mRNA extraído do fígado de ovino. Parte da região de codificação do cDNA da GDH de ovino foi amplificada por PCR usando oligonucleotídeos iniciadores sintetizados a partir do alinhamento de sequências de ORFs de Ovis aries, Bos taurus, Homo sapiens, Rattus norvegicus e Mus musculus disponíveis em banco de dados. O cDNA foi clonado no vetor pGEM^®-T Easy (Promega) e inserido em células cálcio-competentes de Escherichia coli DH10B através de choque térmico. O DNA plasmidial foi purificado e após o sequenciamento a presença de um inserto de 1292 pb foi confirmado. O alinhamento da sequência deduzida de aminoácidos com outras espécies revelou alta homologia entre as GDH.