Eficiência de diferentes protocolos de extração de DNA em macieira

Resumo

Existem diversos protocolos para a extração de DNA vegetal, que proporcionam concentrações e qualidade variáveis de DNA em função da interação entre os componentes das soluções de extração e os compostos dos tecidos vegetais interferentes, como polifenois e proteínas. O objetivo da realização do trabalho foi testar a eficiência de protocolos de extração de DNA a partir de folhas de macieira. Testou-se três protocolos de extração de DNA: Kit FastDNA^® SPIN da MP Biomedicals; adaptação a partir do Mini Kit DNeasy^® Plant da Qiagen; adaptação do protocolo CTAB. Foram utilizadas folhas jovens frescas e congeladas dos genótipos M-10/09, SCS426 Venice e SCS427 Elenise. A pureza e a concentração das amostras de DNA obtidas foram analisadas em espectrofotômetro. O DNA foi testado via reações de PCR com o iniciador SAND, que acessa uma região do genoma da macieira associada a um fator de transcrição. As maiores concentrações de DNA foram proporcionadas pelo protocolo CTAB adaptado. Já quanto à pureza, considerou-se satisfatório o protocolo adaptado a partir do Mini Kit DNeasy^® Plant e o CTAB adaptado, enquanto que todos os protocolos foram eficientes para a amplificação dos fragmentos alvo via reações de PCR. Dessa forma, os três protocolos podem ser utilizados para a extração de DNA de macieira a partir de folhas. Contudo, com a utilização do protocolo CTAB observou-se elevada eficácia, em razão da maior qualidade e concentração de DNA extraído, além do menor custo relativo no processo de extração.